在植物elisa檢測(cè)試劑盒檢測(cè)中除了包被外，一般需進(jìn)行45加樣。在定性測(cè)定中有時(shí)不強(qiáng)調(diào)加樣量的準(zhǔn)確性，例如規(guī)定為加樣一滴。此時(shí)應(yīng)該使用相同口徑的滴管，保持準(zhǔn)確的加樣姿勢(shì)，使每滴液體的體積基本相同。在定量測(cè)定中則加樣量應(yīng)力求準(zhǔn)確。標(biāo)本和結(jié)合物的稀釋液應(yīng)按規(guī)定配制。加樣時(shí)應(yīng)將液體加在孔底，避免加在孔壁上部，并注意不可出現(xiàn)氣泡。
1、把試劑混勻，切記實(shí)驗(yàn)時(shí)不要加理大量含有泡沫的液體，避免實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生誤差。
2、跟數(shù)據(jù)測(cè)樣決定板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3、加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔 加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。
4、甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5、每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6、甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7、每孔加入底物各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。一定要避免光照。
8、取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
9、在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
操作注意事項(xiàng)：
1、試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫.稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄；
2、實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存；
3、用干凈的塑料容器配置洗滌液，用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品；
4、洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水；
5、底物A應(yīng)揮發(fā)避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋，底物B對(duì)光敏感避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下；
6、加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
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